一个新的七氟醚抗性基因功能的初步研究
中国医学科学院 作者：刘红 2005-9-23 14:57:00 发表评论
目的：吸入麻醉药自临床应用以来，已有一百五十多年的历史，但其作用机制至今不完全清楚，本研究应用分子生物学技术克隆了对吸入麻醉药七氟醚耐药的相关基因，并对其基因功能进行了初步的探索，以期从另一角度研究吸入麻醉药作用机制。 方法：本研究采用对七氟醚敏感和耐药的果蝇品系为实验组，以野生型黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）为对照组。应用荧光标记反转录差异显示PCR（fluoroDDRT PCR）技术分离差异表达的基因片段；从测序凝胶中分离出表达差异的片段后，以PCR反应扩增这些差异片段并回收；用Northern印迹杂交确证阳性差异片段；通过cDNA末端快速扩增技术（RACE）扩增其全长cDNA，运用生物信息软件（NCBI 和 TIGR 等服务器）对其进行分析，推测基因可能的功能。用RT PCR方法分析基因在果蝇脑、胸部神经节和身体的表达水平；在COS-7细胞系中进行缺氧实验以初步分析基因的功能。 结果：和野生型黑腹果蝇比较，从对七氟醚敏感和耐药品系中回收了32条差异片段，Northern印迹杂交确证1条阳性片段：No.8基因片段，其在耐药品系中高表达；RACE法扩增该片段获得了2.0 kb的全长cDNA，位于果蝇Chr2R 44D1区域内, 与果蝇CG11669基因高度同源，为一功能未知基因，通过对该基因的序列分析，发现其含有α淀粉酶的结构域，推测有可能具有α葡萄糖苷酶分子的功能。应用RTPCR方法分析，发现该基因在果蝇的身体中的表达水平较高，在胸部神经结中的表达水平很低，在头部未检测到该基因的表达。基因在cos-7细胞系中过表达后，给予co
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